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植物树叶总蛋白组织样品处理方法
发布时间:2018-07-30   点击次数:669次

植物树叶总蛋白组织样品处理方法

对多数从动物或植物组织里提取总蛋白质而言,同样没有一种通用的程序。但遵循的原则基本相同。下面列出两种提取植物树叶总蛋白程序:

裂解液制备:

A,7M Urea,2M Thiourea,4%(w/v)CHAPS,40mM Tris-Base,40mM DTT,2%Pharmalyte pH3-10.

B,905M Urea, 2%(w/v)CHAPS, 0.8%(w/v)Pharmalyte pH3-10,1%(w/v)DTT and 5mM Pefabloc proteinase inhibitor;

 

三氯醋酸-苯酮沉淀法提取植物树叶总蛋白程序:

  1. 先将植物树叶置于液氮中速冻,后放置于Gd200组织研磨仪中研碎;
  2. 悬浮于含10%三氯醋酸和0.07%β-巯基乙醇的丙酮溶液,-20℃冰浴;
  3. 让蛋白质沉淀过夜然后离心(4℃,40000g,1h,弃上清液;
  4. 重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的冰预冷丙酮溶液里;
  5. 离心(4℃,40000g,1h)后真空干燥沉淀;
  6. 用(A)或(B)裂解溶液溶解沉淀,离心(4℃,40,000g,1h);
  7. Brandford法定量蛋白,然后分装保存在-78℃备用

 

超速离心法:

  1. 取材;
  2. Gd200组织研磨仪在液氮冷冻条件下将样品研成粉末,每1g样品加入0.5ml裂解液,使用Gd200高通量组织研磨仪研磨匀浆30s
  3. 组织悬液15℃,10,000×g离心10min
  4. 上清液4℃,150,000×g超速离心45min
  5. 小心避开上层漂浮的脂质层,吸取离心上清640,000g再次离心50min;
  6. 取离心上清。Brandford法定量蛋白,分装后置-75℃保存。
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李虹雯
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